美國(guó)Abraxis腹瀉性貝類毒(DSP)檢測(cè)試劑盒的詳細(xì)信息

1.概述腹瀉性貝類毒素檢測(cè)試劑盒的原理是酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法，用于水及水產(chǎn)品中腹瀉性貝類毒素的定量測(cè)定。岡田酸是腹瀉性貝類毒素的一種。對(duì)于水產(chǎn)品需要做前處理，不可以直接檢測(cè)。如果需要的話陽(yáng)性樣品可以通過(guò)HPLC和GC/MS來(lái)驗(yàn)證。2.安全性說(shuō)明書(shū)試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)溶液里含有少量的岡田酸。底物中包含有四甲基聯(lián)苯胺，終止液中含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸，如果不小心接觸了請(qǐng)馬上用水沖洗。3．保存和穩(wěn)定性試劑盒應(yīng)保存在2-8℃，不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復(fù)到室溫（20-25℃）。有效期內(nèi)試劑盒中的試劑都可以使用。4．原理試劑盒的原理是直接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法，通過(guò)特異性抗體來(lái)識(shí)別岡田酸。當(dāng)樣品中含有岡田酸時(shí)，樣品中的岡田酸與岡田酸酶結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合溶液中的岡田酸抗體。岡田酸抗體與包被在微孔板上的羊抗鼠二抗結(jié)合。經(jīng)過(guò)一步洗滌加入底物溶液，產(chǎn)生有色反應(yīng)。產(chǎn)生的綠色的顏色深度與樣品中岡田酸的含量成反比。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。用酶標(biāo)儀在450nm處測(cè)定吸光度值。通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來(lái)計(jì)算樣品中岡田酸的含量。5. 岡田酸試劑盒的局限性和可能的干擾對(duì)在水樣中經(jīng)常出現(xiàn)的多種有機(jī)物和無(wú)機(jī)物已近作過(guò)檢測(cè)對(duì)此試劑盒并無(wú)干擾。由于化合物的易變質(zhì)性由基質(zhì)反應(yīng)引起的干擾是不可能完全避免的。操作不當(dāng)也可能導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果錯(cuò)誤，比如：試劑盒保存條件不對(duì)、錯(cuò)誤的加液順序、試劑的量沒(méi)有加準(zhǔn)確、孵育的時(shí)間太長(zhǎng)或太短、孵育的溫度太高或太低。與其它檢測(cè)方法一樣對(duì)陽(yáng)性結(jié)果要求通過(guò)其它傳統(tǒng)的方法來(lái)驗(yàn)證。6．岡田酸測(cè)定的重要性岡田酸是腹瀉性貝類毒素的一種，受岡田酸污染的貝類和有害藻類大量繁殖的有關(guān)。DSP可以引起劑量依賴型的腹瀉、惡心、嘔吐癥狀。FDA對(duì)ASP的限量是0.2ppm。歐洲是160ug。這個(gè)試劑盒可以檢測(cè)40個(gè)樣品（做兩個(gè)重復(fù)）。需要少量的樣品，檢測(cè)時(shí)間少于2小時(shí)。7．試劑盒特性敏感性：1.7ng/ml重復(fù)性：標(biāo)準(zhǔn)的變異系數(shù)小于10%，樣品的變異系數(shù)小于15%特異性：腹瀉性貝類毒素檢測(cè)試劑盒能檢測(cè)Okadaic acid及其它DSP，它們的結(jié)合程度是不同，以下表格中展示的是相關(guān)值及交叉反映率（%CR），以下所有濃度均為ppb級(jí)。種 類% CR種 類% CROkadaic Acid (DTX)100%Dinophysistoxins DTX-250%Dinophysistoxins DTX-150% 樣品：水樣和貝類產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)曲線： A．試劑盒組成：1、包被二抗的微孔板（羊抗兔）2、標(biāo)準(zhǔn)（7種）0、0.1、0.2、0.5、1.0、2.0、5.0、ng/ml3、岡田酸抗體溶液（兔抗岡田酸）6ml4、岡田酸酶標(biāo)記物6ml 5、樣品稀釋液（10倍濃縮）25ml，用于稀釋樣品6、5x 濃縮洗液100ml7、顯色液（底物）TMB,16ml8、終止液12mlB 測(cè)試前準(zhǔn)備微量移液器和吸頭是必須使用的，推薦使用排槍加液這樣可以確保整個(gè)微孔板上的孔在每個(gè)步驟的反應(yīng)時(shí)間趨于一致。在做同測(cè)試時(shí)要使用同一個(gè)盒子里的試劑和標(biāo)準(zhǔn)。在操作前仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)。1、使用前將所有的試劑拿到室溫（19℃-25℃）。2、從鋁箔袋中拿出要求數(shù)量的微孔條，放入干燥劑并重新封好袋子以免微孔條受潮。置于4-8℃保存。3、標(biāo)準(zhǔn)液，對(duì)照，酶結(jié)合物，底物，終止液不用稀釋直接使用。4、洗液在使用前要以1：5的比例稀釋后使用（100 mL 5X 洗液加 400 mL 無(wú)離子水）5、由于終止液中含稀硫酸拿的時(shí)候要小心。C.操作步驟1、在對(duì)應(yīng)的微孔中加入100μL的標(biāo)準(zhǔn)和樣品（推薦做2-3個(gè)重復(fù)）2、每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL岡田酸酶標(biāo)記物溶液。3、每個(gè)測(cè)試孔都加入50 μL岡田酸抗體溶液，用封口膜把微孔板蓋上，輕輕的震蕩微孔板30秒使里面的液體混勻。不要使液體灑出。4、在室溫下孵育60分鐘。5、孵育完成后，把封口膜取掉，將微孔中的溶液用力地倒入水槽中，用1 X的洗液洗板3次，每孔每次至少加入250 μL1 X的洗液。拍板，去掉殘留的洗液。6、每個(gè)測(cè)試孔加入150μL的顯色液（底物）。室溫孵育20-30分鐘，此步驟避免太陽(yáng)光照射。7、每個(gè)測(cè)試孔加入100μL終止液。8、用酶標(biāo)儀在450nm 下讀取每個(gè)孔的吸光度值（OD）（在加入終止液15分鐘內(nèi)完成）。D 結(jié)果分析結(jié)果分析可以利用商業(yè)ELISA分析軟件(4-parameters,Logit/Log)。手工計(jì)算可以先計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值的平均值，然后計(jì)算每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0（用其它標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值除以零標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值乘以100%）。以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的%B/B0做Y軸，以每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)的岡田酸的濃度做X軸構(gòu)建標(biāo)準(zhǔn)曲線。通過(guò)利用標(biāo)準(zhǔn)曲線，把樣品的%B/B0代入標(biāo)準(zhǔn)可以計(jì)算出樣品中岡田酸的濃度。樣品中岡田酸的含量小于0.1 ppb認(rèn)為陰性。當(dāng)樣品中岡田酸的含量大于5.0 ppb要稀釋后再測(cè)定。