德國皇家微生物快速檢測系統
德國皇家微生物快速檢測系統RVLM
德國RBG公司榮譽出品,
RVLM微生物快速檢測系統的分析法已通過ISO 16140:2003 食品和動物飼料的微生物學-代替法的驗證協議
品質的微生物檢測系統RVLM 可完全取代傳統微生物實驗室的高科技結晶.
德國皇家微生物快速檢測系統RVLM
主要特點：
檢測原理:集傳統檢驗方法優點于一身:-培養皿法-酶法（β-葡萄糖苷酸酶分析）-免疫法（抗原搜尋）-基因法（基因搜尋）
檢測范圍：
活菌總數;
大腸菌群;
大腸桿菌;
腸道桿菌科;
金黃色葡萄球菌;
綠膿桿菌;
沙門氏菌;
李斯特菌;
腸球菌;
亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌;
產氣莢膜梭菌;
霉菌(曲霉屬真菌、曲霉菌);
酵母菌。 以后還有陸續有其他微生物菌種的檢測瓶相繼面世。包括軍團菌等應用范圍：衛生控制：-食品（HACCP）-廚房、工具、表面（HACCP）-水質-(CDC)疾病控制、進出口檢驗檢疫-藥品及化妝品與我們的生活息息相關，例如：咖啡館、餐廳水 分析實驗室和HACCP診斷農產品及相關加工公司藥廠、藥房、化妝品廠環境監測機構水配送公司消費者保護團體、工商管理機構室內空調調節公司源檢測、制水廠
檢驗樣本無需任何前處理-液態樣本，固態樣本和表面樣本均無需前處理定性和定量分析-搭配檢測機：100%的定量分析-肉眼判讀：定性或半定量分析簡單便捷-簡單的三個步驟得到檢測結果檢驗迅速-是傳統檢驗方法速度的2～5倍高靈敏性-可以檢測到1目標微生物（理論極值）高特異性-特異性高達99.999%（理論極值）檢測瓶就是實驗室-微生物檢測瓶隨時可用-未受過嚴格訓練的檢測人員也可隨時隨地進行檢測使用后安全丟棄-和過期藥物同樣處理
微生物快速診斷 RVL@產品 Q&A 1. 微生物檢測瓶除可以檢測活菌外，死菌可以檢測么？ 答：不能檢測死菌。 2. 微生物檢測瓶可以檢測厭氧菌么？ 答：檢測瓶的檢測范圍即包括厭氧菌（亞硫酸鹽梭狀芽胞桿菌 Sulphite reducing Clostridia，產氣莢膜桿菌 Clostridium perfrigens），也包括需氧菌。 檢測不同種微類生物的檢測瓶中試劑不同。對于厭氧菌，我們有特殊的試劑，如檢測產氣莢膜桿菌 Clostridium perfrigens。 3. 檢測瓶的檢測原理都分別用到了哪些檢測方法？ 答：培養皿法、酶法、免疫法、基因法。 4. 對于第 3 題，你能簡要敘述這些方法的優劣勢么？ 答：與傳統的培養基法、膠體金、酶免法和 PCR 法不同，德國皇家微生物檢測儀是多種方法的集合。單獨使用一種檢測方法都有自己的缺點：比如， PCR 法需要技術人員和昂貴設備； 培養基法操作復雜； 膠體金法靈敏度低； 酶免法特異性捕捉不充分。 德國皇家微生物檢測瓶快速檢測系列產品是以上多種方法的綜合運用，吸收了每種方法的優點，彌補了各種方法的不足。5. 用微生物檢測瓶進行微生物檢測時，步是先放樣本還是無菌水？ 答：都可以。 6. 對樣本進行微生物接種時，需要在無菌環境下進行么？ 答：檢測瓶是通過捕捉特異性，結合多種檢測法進行分析。無菌環境與否均可（臨檢的場所大都是非無菌環境）。 7. 檢測瓶可以檢測表面樣本和固態樣本么？ 答：可以檢測固態、液態、表面樣本（用所配棉棒沾濕無菌水后涂抹表面）。紙漿等膏狀、糊狀、粘稠狀昂本都可以檢測。 8. 檢測瓶在檢測固態樣本時需要對進行研磨、稀釋等前處理過程么？ 答：直接將樣本放入檢測瓶，無需任何前處理。 9. 每次檢測的無菌水用量是多少？ 答：一般是 11ml。如果是檢測液態樣本或水樣本，建議加樣 1ml，加無菌水 10ml。 10. 放入樣本和無菌水后，“搖勻使其充分溶解和混合”這一操作步驟，無論定性分析還是定量分析，都是必要的步驟么？ 答：是的，搖勻無論是定性還是定量分析都是必要步驟。 11. 不同的微生物對應的孵育溫度是一樣的么?請舉例說明。 答：不一樣。37 攝氏度居多：活菌總數、沙門氏菌、李斯特菌等，大腸桿菌 44 攝氏度等，詳細請參考對照表。 12. 若是檢測冷菜或者冰欺凌這樣的樣本，孵育是否應該低溫進行？ 答：對檢測樣本自身的溫度沒有限制，檢測樣本中微生物，請嚴格遵照所檢測微生物對應的孵育溫度，依然根據對照表。 13. 如果想加快檢測時間，孵育溫度可以調至高于所檢測微生物對應的孵育溫度？ 答：不可以，嚴格遵照對照表。 14. 操作手冊規定放入的樣本量為多少？ 答：0.1g‐1.0g 或 0.1ml‐1.0ml。 15. 若放入的樣本量高于規定的樣本量，檢測結果會不同，或者檢測結果（定量時）增加么？ 答：樣本量多一些或少一些，定量分析結果不會有變化。 原因：傳統的微生物學檢測方法，包括參考方法，即基于固體選擇性培養基的菌落計數法內在的統計分散度（統計名詞，也稱為統計變異，是變量或概率分布蔓延，常見的例子是方差，標準差和四分位距。）大于 50%。很多實驗室已經證實皇家生物檢測法與其他檢測方法比統計分散度低，可信度高。但不管怎樣，25‐30%的統計分散度還是有的。另外，由采樣產生的統計分散度同樣應該考慮在內，尤其是微生物經常容易繁殖的固態的肉制品類。 因此，加樣是 0.5g 或 1.5g 所得的結果在統計上是等價的（和其他任何方法獲得的結果相等）。16. 對于面粉這類低密度的散裝樣本，可以照常檢測么？ 答：可以。 17. 對于醬油這樣的深色樣本，會影響定性檢測結果的判讀么？您有什么好的建議？ 答：如果搭配檢測儀進行定量分析，不存在這個問題；如果只是通過肉眼觀察變色進行定性分析，深色樣本如果擔心肉眼不能夠清晰的辨認，建議進行稀釋后再進行檢測。還記得第 15 題得答案么？加樣是 0.5g 或 1.5g 所得的結果在統計上是等價的和其他任何方法獲得的結果相等）。稀釋同樣的道理。 18. 如果是檢測水樣，還需要加入無菌水么？加多少？ 答：建議加水樣 1ml，無菌水 10ml。 19. 不同的微生物對應的開始顏色和呈陽性的顏色都相同么？請舉例說明。 答：不同。 例如，沙門氏菌孵育 10 分鐘左右出現的開始顏色為紅色，陽性顏色為黃色；李斯特菌，開始顏色為藍色，陽性顏色為黃色。具體請參考對照表。20．微生物檢測儀兼備孵育機的功能么？ 答：是的。將檢測瓶充分搖勻后立即放入檢測儀，在軟件上進行檢測菌類設置后。檢測儀會自動進行孵育，并自動給出定量分析檢測。 21. 微生物檢測儀兼備振蕩器的功能么？ 答：不具備。需用手用力搖 2‐3 分鐘，或振蕩器搖 20 秒左右，直至充分溶解或混合。 22. 微生物檢測儀的判讀原理是什么？ 答：微生物檢測儀是一款精密的光學判讀儀。通過光學原理精密探測檢測瓶中的顏色變化，并給出的定量分析檢測。 23. 微生物檢測儀是外接電源，還是自帶充電電池？ 答：兩者都有。電池是標準的筆記本電腦電池，更換、維修方便。 24. 微生物檢測儀可以同時、獨立地檢測多少個檢測瓶？ 答：8 個。同時、獨立的探測，并分別給出定量分析。 25. 微生物檢測儀定量分析，需要在電腦上安裝分析軟件么？ 答：需要按照配套分析軟件。 26. 怎樣的計算機操作系統對該分析軟件兼容？ 答：XP, Vista, Windows 7 27. 如果檢測儀是初次開機，接通電源后需要稍等多少時間再進行下一步操作？ 答：若初次開機，開機后停留 40 秒左右繼續操作為宜。 28. 檢測儀進行定量分析時，充分混合后的檢測瓶是應該立即放入檢測儀，還是稍等片刻后再放入？ 答：充分混合后立即放入檢測儀。 29. 檢測瓶放入檢測儀后，在檢測儀分析軟件點擊開始，軟件界面上對應檢測孔的燈會變成什么顏色？ 答：在所檢測檢測瓶對應的操作界面上點擊“Start”（開始），對應孔的指示燈由綠色變為紅色。表明檢測開始并進行中。 30. 當檢測結束后，分析軟件界面對應孔的燈光會恢復為什么顏色，說明檢測結束，可以放入新樣本? 答：在檢測進行時，指示燈為紅色。當檢測結束后，指示燈變為綠色。此時在對應的檢測儀檢測孔放入新的檢測瓶開始下一輪檢測是可以的。檢測時間由細菌的存在量決定（當微生物含量較高時），或由對照表對應的檢測時長決定（當微生物含量很低時，應超過對照表中檢測 1CFU 對應的檢測時間）。 31. 微生物檢測瓶的分析時間和檢測瓶中微生物含量之間是什么關系？ 答：反比關系。即微生物含量越多，對應的檢測時間越短；微生物含量越少，對應的檢測時間越長。 如果樣本中微生物含量過高，幾分鐘甚至幾秒鐘內檢測儀的定量分析結果就會顯著變動；如果微生物含量很低，（由于 RVLM 是非常精密靈敏的儀器）有經驗的使用中可以通過幾小時甚至幾分鐘的數據變化初步判斷微生物目標含量是否達到規定要求。 32. 分析檢測前是否應該有明確的實驗目的以確定你要檢測的微生物含量（根據國家標準規定微生物的存在量。）？ 答：這樣是的。 例如，根據國家 GB 標準，或根據國際 EC 標準等，都有明確（或部分明確）地注明微生物在不同家禽、畜牧物種中的允許存在量。具體地說，在進行微生物檢測時，我們首先要明確檢測目的。如、國際 EC 2073:2005標準中規定，大腸桿菌在鮮肉中允許的存在量為 CFU 10^2/g，即每克鮮肉中大腸桿菌的含量不允許超過 CFU 10^2。此時我們根據對招表，找到大腸桿菌所在列，查 log CFU 10^2=2，即在大腸桿菌行中找到數字 2 所對應列的數字為 14。無論是肉眼進行定性分析，還是檢測儀進行定量分析，要檢測樣本中大腸桿菌含量是否超過 CFU 10^2，長在 14 小時即可得到嚴格精準的分析結果。 如果是檢測瓶進行定量分析，有經驗的實驗員會在很短時間內（譬如十幾分鐘）根據定量分析數據的動態變化情況，初步判斷出檢測瓶中的微生物含量。 33. 明確要檢測微生物含量的目的是什么，對照表起到什么作用？ 答：是確定所檢測微生物對應的孵育溫度、開始顏色、分析時間、陽性顏色的標準對照的依據。具體的使用方法請參考上一題答案。 34. 什么是 CFU? 答：colony‐forming unit,菌落形成單位。 經培養所得菌簇形成單位的英文縮寫。 細菌（可見）和真菌的測量單位。CFU:colony‐forming unit,菌落形成單位，將稀釋后的一定量的菌液通過澆注或涂布的方法，讓其內的微生物單細胞一一分散在瓊脂平板上，待培養后，每一活細胞就形成一個菌落。與常規利用顯微鏡對微生物數量進行測量不同，主要是對可見（即多數情況下形成菌落）的細菌數量進行測量的單位。 意思就是每毫升菌液中含有多少單細胞！ 傳統上就叫“個”。但是，我們知道，一個菌落并不一定是一個細菌所生成，也可能是由一簇細菌（一個細菌團）所生成，這時候再叫“個”就不太準確啦，準確的叫法就是“菌落形成單位”，英文縮寫“CFU”。就像“公斤”和“千克”，只是叫法不同，數量上沒有變化。 CFU 代表“colony forming units”。CFU/mL 指的是每毫升樣品中含有的細菌群落總數，也有用 CFU/g 即對應固體培養基。 35. 假如我要檢測樣本中大腸菌群的菌落含量不得超過 106CFU/g 或 106CFU/ml， 用肉眼觀察瓶中顏色變化進行定性分析，請對照“孵育溫度和比色對照表”詳細敘述檢測步驟。 答：步：放入樣本 放入所要檢測的樣本（0.1‐1.0g，或 0.1‐1.0ml），加入 11ml 無菌水（根據檢測物情況，若為液體，建議加樣 1ml，加無菌水 10ml。差別不大），蓋緊瓶蓋。 第二步：搖動瓶子直到溶劑充分溶解或混合。 如果用手需有力搖 2‐3 分鐘左右；或用振蕩器搖，需時 20 秒左右。 第三步：在適當時間判讀檢測結果 (1)若肉眼定性分析。根據對照表確定大腸菌群對應的孵育溫度、開始顏色、檢測時間、陽性顏色等信息。 孵育溫度：根據對照表為 37℃； 開始顏色：即搖勻后放入 37℃恒溫箱孵育 10 分鐘左右會呈現的顏色。根據對照表為紅色； 檢測時間：我們要檢測標準為大腸菌群含量不超過 106CFU/g 或 106CFU/ml。根據對照表，對應列log 106=6，找數字 6 對應行的數字為 6，即檢測時間為 6 小時。即，觀察時間確定為 6 小時。 陽性顏色：根據對照表，大腸菌群的陽性顏色為黃色。 確定了以下信息后，我們把充分混合后的檢測瓶放入 37℃恒溫箱，這樣一直放置。孵育 10 分鐘左右，我們觀察會發現檢測瓶會呈現檢測大腸菌群對應的開始顏色——紅色。繼續放置，到 6 個小時的時候進行觀察，如果顏色變為黃色，說明樣本中大腸菌群含量超過 106CFU/g 或 106CFU/ml，樣本為不合格品；若沒有變為黃色，而是始終保持開始顏色紅色，或其他中間顏色，說明樣本中大腸菌群含量未超過 106CFU/g 或 106CFU/ml，樣本為合格品。 (2)若檢測儀進行定量分析 此步驟請參見下一題。 第四步：無菌處理 后別忘記按下檢測瓶的瓶蓋上方對檢測瓶進行滅菌處理。按下瓶蓋后搖一搖，好了，可以安全丟棄了。 注意：在進行實驗操作時，不要碰到檢測瓶的瓶蓋頂部，以免在不當的時候進行了無菌處理，影響試驗結果。 36. 若第 34 題搭配檢測儀進行的定量分析，請詳述操作步驟。 答：(2)若檢測儀進行定量分析 將充分混合后的檢測瓶立即放入檢測儀。 啟動檢測儀軟件，點擊“Station”（狀態）錄入相關信息（包括：檢驗員姓名、檢測、檢測樣本所屬客戶、檢測時間等信息）；在軟件操作界面“analysis type”（檢測種類）下拉菜單中勾選所檢測的微生物種類，點擊 ok，點擊開始，指示燈變紅， 開始進入分析狀態。觀察檢測儀的定量分析數據變化，進行判斷。 37. 為什么在檢測結束之前，不能按下檢測瓶的瓶蓋？ 答：無菌處理。瓶蓋中還有無菌處理物質，按下瓶蓋，瓶蓋中的無菌處理物進入瓶內，與瓶內溶劑進行反應，完成無菌處理。因此，實驗過程中請不要輕易觸碰檢測瓶的瓶蓋。 技術人員選答題，銷售人員必答題：1. 檢測瓶可以檢測多少種微生物，分別是什么？ 答：活菌總數、大腸菌群、大腸桿菌、腸道桿菌科、金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、沙門氏菌、李斯特菌、腸球菌、亞硫酸鹽還原梭狀芽孢桿菌、產氣莢膜梭菌、曲霉屬真菌、曲霉菌、酵母菌。 以后還有陸續有其他微生物菌種的檢測瓶相繼面世。包括軍團菌等。 2. 檢測瓶在檢測大腸桿菌時，可以檢測到所有的大腸桿菌菌株么（包括目前流行的 EHEC?） 答：是的，可以檢測到全部的大腸桿菌菌株，包括 EHEC 腸出血性大腸桿菌（E.coli O104, O111, O157 等） 3. 檢測瓶的應用范圍有哪些？ 答：衛生控制：食品(HACCP)，廚房、工具、表面(HACCP)，水質，(CDC)疾病控制、進出口檢驗檢疫、藥品及化妝品。 與我們生活息息相關的：環境監測機構，農產品及相關加工公司，水源檢測和制水廠，水配送公司，藥廠、藥房、化妝品廠，分析實驗室和 HACCP 診斷，奶制品廠，咖啡館、餐廳，消費者保護團體、工商管理機構，室內空調調節公司，尤其能應用于軍事、大型展會等的食品快速檢測。 4. 你認為大腸桿菌檢測瓶、李斯特菌檢測瓶、沙門氏菌檢測瓶除了是用于食品安全檢測外，適用于醫療么？ 答：大腸桿菌(EHEC)、李斯特菌、沙門氏菌，這三款檢測瓶可用于體外臨床檢測。 Royal 微生物檢測瓶系列的定位依然是食品安全。在歐洲，對人體進行微生物的臨床體外檢測是非常少的，歐洲的各方面安全控制的很好。然而，在發展中國家，以上三款微生物的人體體外臨床檢測經常發生。而以上三款檢測瓶用于體外臨床檢測的安全性和準確度都可以保證。 4 合 1 試紙片和檢測瓶市場定位的區別 1）4 合 1 試紙片和檢測瓶比較 4 合 1 試紙片配合其分析儀，一臺分析儀可以同時檢測 48 個試紙片。因此，從經濟成本的角度考量，一開機就是 48 片同時檢查。對于醫院，攢夠 48個糞便樣本后，性進行分析。 檢測瓶，一個樣本就可以進行檢查。而且更大的優勢在于，這款產品會非常受醫生的歡迎。因為醫生可以不用接觸樣本，這是目前大多數的醫院檢測無法做到的。把瓶子給病人，讓病人自己將糞便樣本放入后送回給醫生。醫生拿到檢測瓶，在醫院的振蕩器上搖勻后，放入孵育機，等待結果判讀即可。 2）檢測瓶與醫院目前傳統檢測法的比較 目前醫院的檢測方式依然是培養皿法居多。這種方法令醫生反感的地方是醫生要接觸樣本。如果醫生處于懷孕期，接觸到李斯特菌的后果就是流產。如果檢測臺沒有處理干凈，也容易導致微生物的傳播。 檢測瓶，醫生完全不用接觸樣本。樣本放入檢測瓶的的這個過程交給病人在衛生間去操作就可以。醫生要做的就是簡單的搖勻和放入孵育器孵育（振蕩器和孵育器都是醫院的常規設備）。 5. 無論固態、液態還是表面樣本，在檢測時是否都無需進行前處理？ 答：是的 6. 檢測儀的特異性是多少？ 答：99.999%（理論極限值） 7. 檢測儀的靈敏度是多少？ 答：可以檢測到 1 個活菌的理論極限值。 8. 做定性分析時，檢測需要幾步，分別是什么？ 答：三步：加樣；搖動瓶子直到充分溶解和混合；在適當時間判讀結果（根據對照表）。后不要忘記按下瓶蓋上方進行無菌處理。 9. 做定量分析時，檢測需要幾步，分別是什么？ 答：同上。具體請參考檢測儀操作文檔。 10. 檢測后按下檢測瓶瓶蓋的目的是什么？ 答：無菌處理，請參考上第 45 題。 11. 檢測瓶的儲存溫度是多少？ 答：在 20℃-25℃左右既可以儲存，這個溫度下很方便運輸，對于臨檢來說是有利的。但隨著大氣溫室效應，夏天時還是要注意儲存溫度不要超過 25℃，負責會影響檢測瓶檢測的靈敏度。然而，如果可以放到 4℃進行儲存，保質期可以延長近一倍。 12. 如果預延長檢測瓶的有效期，儲存溫度為多少？ 答：4℃，具體見下表。
