馬源性成分核酸試劑盒（熒光PCR法）

產品貨號：PA75A\01

版  本  號：Version 1.0

包裝規格：50 T/盒

產品說明：

馬源性成分核酸試劑盒（熒光PCR法）,采用Taqman探針技術，以馬源性成分的保守基因為靶點設計特異性引物和探針，用于樣品中馬源性成分核酸的輔助檢測。本產品引入了dUTP/UDG系統，可降解含U的ssDNA和dsDNA，消除由PCR產物導致的交叉污染。

馬源性成分核酸試劑盒產品組分：

注：不同批號產品的成分之間不可以混用或互換！！！

儲存條件與有效期：

-20℃避光儲存，有效期12個月。干冰運輸。重復凍融小于5次。

適用儀器：

ABI 7500、宏石96P、Bio-Rad CFX96實時熒光定量PCR儀等。

樣品要求：

1.          適用樣品類型

動物組織制品、食品、飼料或血液樣本；

馬源性成分核酸試劑盒要求送檢新鮮樣品，禁止反復凍融！

2.          樣品處理（核酸提取區）

參照《NY/T 541-2016 獸醫診斷樣品采集、保存與運輸技術規范》等標準進行樣品前處理， 使用商業化試劑盒提取樣品中的核酸。提取后的核酸應立即檢測，否則凍存于-20℃，保存時間不超過6個月，禁止反復凍融！

馬源性成分核酸檢測試劑盒檢測方法：

為了防止污染，實驗需分區操作！！！

注：核酸提取參照樣品要求，在核酸提取區或樣品處理區進行。

1.          試劑準備（在試劑準備區進行）

取出試劑盒中各組分以及自備試劑，放置室溫，待溫度平衡至室溫，混勻后備用。隨后按照每個反應為

（1）12.5μL酶反應液+7.5μL引探預混液來配制熒光混合液。當待檢樣品數為n時，所需反應數N=樣品數(n)+陽性對照(1)+陰性對照(1)。

（2）根據檢測樣品數量，建議每次檢測均設置陰性對照和陽性對照。將所需數量（N）的熒光混合液分配到每個PCR管（或八連管）中，20 μL/管。

當準備使用時，再轉移到樣品處理區。

1.          樣品加樣（在樣品處理區進行）

在每個PCR管中分別加入5 μL經提取的待測樣品核酸、陰性對照和陽性對照，蓋上管蓋， 瞬時離心，使液體全部沉于管底。

2.          qPCR擴增（在擴增與分析區進行）

（1）熒光通道選擇

熒光基團選擇FAM通道檢測馬源性成分；淬滅基團設置為none。如ABI qPCR儀，還需設置Passive Reference為ROX。其他儀器請參考儀器說明書。

（2）qPCR擴增程序設置

設置反應體系為25 μL.

3.          結果分析（以ABI 7500 qPCR儀為例）

反應結束后，qPCR儀將自動生成結果。若儀器自動生成的擴增曲線或閾值線有異常，用戶可根據實際情況自行進行調整，基線Start值可以在 3~10，基線End值可設在5~20，調整各擴增曲線的基線區相對水平即可。點擊Analyze進行分析。

4.          質量控制

試劑盒中各控制項應符合下列要求，否則實驗無效。